光片熒光顯微鏡技術已經徹底改變了生物顯微鏡技術螺男，使生物樣品的低光毒性長期3D成像成為可能棒厘。
光片熒光顯微鏡(LSFM)簡介
光片熒光顯微鏡技術已經徹底改變了生物顯微鏡技術下隧，使生物樣品的低光毒性長期3D成像成為可能奢人。
光片熒光顯微鏡(LSFM)是一種簡單但功能強大的成像技術，可以對活體標本進行快速且無光毒性的3D檢查淆院。大多數LSFM實現依賴于熒光報告的樣品標記來成像目標生物結構何乎。這提供了熒光顯微鏡的特異性優(yōu)勢，使其在各種生物實驗中取得成功土辩。在LSFM中，通過樣品的激光光片介導熒光激發(fā)拷淘。在其通過組織的傳播過程中各墨，部分激光向檢測攝像機散射，這些光通常被特定的濾光片阻擋和丟棄启涯。然而贬堵，這種散射光可以攜帶有關樣品結構和組成的有價值的信息。當散射是非彈性的结洼，例如拉曼散射時扁瓢，得到的光譜可以提供三維的樣品化學成分信息。另一方面补君，當散射是彈性時引几，它揭示了樣品在不同空間尺度上的結構信息:遠小于(瑞利散射)，與(米氏散射)相當挽铁，甚至遠大于(幾何散射)光的波長伟桅。這是由于方法協(xié)議的變化。12個折射率中的2個叽掘，即光散射的來源楣铁，是局部分子密度的度量更扁，因此也是生物樣品結構的度量盖腕。除了光學相干斷層掃描(OCT)技術外，樣品的彈性散射很少用作生物成像的對比源浓镜。OCT依靠樣品的紅外光后向散射產生組織的橫截面圖像溃列。在分辨率和穿透深度方面，OCT介于超聲成像和光學顯微鏡之間膛薛，并且由于其通用性已成為醫(yī)學許多領域的重要工具听隐。然而哄啄，當相干光的彈性散射用于OCT或其他成像方式時雅任，由于組織和其他細胞復合物典型的非均勻折射率风范，在穿過樣品時產生復雜的干涉場。由于其顆粒狀外觀沪么，該領域被稱為“散斑圖案”硼婿，對于成像應用，它通常被認為是有害的禽车，因為它疊加了感興趣的特征寇漫。在某些應用中哭当，當應用波前整形時猪腕，可以利用散斑圖來克服不透明樣品中的散射和擴散冗澈，但在復雜性和一般適用性方面并非沒有限制钦勘。
因此，散斑使得彈性散射成為光片成像對比度來源的不良候選亚亲，因為它引入了不希望的局部強度調制彻采，與樣品自身特征產生的強度對比度完全無法區(qū)分。盡管如此捌归，薄片彈性散射顯微鏡已經用于植物根系表型分析，其中圖像質量被證明取決于安裝基板和樣品的濁度惜索。為了減少襯底的誘導背景和散斑噪聲特笋，該技術進一步更新為包括偏振濾波和軸向掃描，但代價是降低了顯微鏡的軸向分辨率巾兆。另一種基于彈性散射的不同實現使用低相干光片照明猎物，而不是軸向掃描，以減少斑點角塑。在這種情況下蔫磨，我們使用一堆遮光片來產生一組以不同角度傳播的光片，這些光片被加在一起以抵消斑點圃伶。該技術被應用于增強小鼠大腦未染色的形態(tài)學神經元結構的可視化堤如。
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