液態(tài)變焦透鏡在顯微鏡領(lǐng)域的應(yīng)用

正文

液態(tài)變焦透鏡在顯微鏡領(lǐng)域的應(yīng)用

（本文部分譯自Focus-Tunable Lenses Enable 3-D Microscopy（DAVID LEUENBERGER, OPTOTUNE AG, AND FABIAN F. VOIGT, UNIVERSITY OF ZURICH））

 

1.介紹

顯微鏡初學(xué)者可能會(huì)感到困惑，當(dāng)他們注意到樣本中只有輕微失焦的部分在圖像中看起來(lái)卻模糊得多屁药。人眼看到的景深似乎比相機(jī)看到的景深要大得多粥血。這種令人困惑的效果之所以發(fā)生，是因?yàn)檠劬δ軌蛘{(diào)節(jié)焦距：在使用顯微鏡觀察時(shí)酿箭，用戶會(huì)不斷地——通常是無(wú)意識(shí)地——通過(guò)調(diào)整眼球晶狀體的焦距來(lái)改變聚焦平面复亏，而不需要觸摸調(diào)焦旋鈕。因此缭嫡，自顯微鏡發(fā)明以來(lái)缔御，可調(diào)焦距的鏡頭能夠幫助研究人員對(duì)微觀物體的三維形狀和紋理有了更直觀的感知。

 

在現(xiàn)代顯微鏡中實(shí)現(xiàn)類似裝置妇蛀，用于電子圖像采集是非常理想的耕突。如今，科學(xué)家們?cè)絹?lái)越需要在越來(lái)越短的時(shí)間尺度上评架，以高空間分辨率成像活體生物的結(jié)構(gòu)和功能【熳拢現(xiàn)代生物顯微鏡也在逐漸從成像夾在載玻片和蓋玻片之間的小樣本，轉(zhuǎn)向3D細(xì)胞培養(yǎng)纵诞、整個(gè)胚胎上祈，甚至在動(dòng)物體內(nèi)成像，以便在更自然的環(huán)境下研究發(fā)育和生理學(xué)。

 

傳統(tǒng)獲取三維成像數(shù)據(jù)需要通過(guò)使用載物臺(tái)或壓電驅(qū)動(dòng)的物鏡Z軸掃描器來(lái)機(jī)械地移動(dòng)物鏡或樣本登刺。由于這些設(shè)備中移動(dòng)部件的機(jī)械慣性籽腕，實(shí)現(xiàn)數(shù)百um Z范圍內(nèi)的體積掃描速率超過(guò)10至20 Hz是非常具有挑戰(zhàn)性的。

 

一種稱為“遠(yuǎn)程聚焦”的替代解決方案涉及改變光線進(jìn)入或離開(kāi)顯微鏡物鏡時(shí)的會(huì)聚度纸俭，以分別誘導(dǎo)激發(fā)或發(fā)射焦點(diǎn)的軸向移動(dòng)皇耗。各種可調(diào)光學(xué)元件可以用于此目的：例如，空間光調(diào)制器揍很、可變形鏡和變焦透鏡郎楼。由于其低成本、簡(jiǎn)單的構(gòu)造和控制以及廣泛的調(diào)焦范圍女轿，可調(diào)焦距透鏡特別適合于要求快速體積采樣且分辨率適中的顯微鏡應(yīng)用。

 

在這篇應(yīng)用文章中壕翩，我們專門討論了沿光軸聚焦的液態(tài)變焦透鏡的使用蛉迹。根據(jù)液態(tài)變焦透鏡的實(shí)現(xiàn)方式和光學(xué)性能要求，可以實(shí)現(xiàn) 30-700 um的軸向聚焦范圍放妈。關(guān)于在顯微鏡中使用液態(tài)變焦透鏡的大多數(shù)討論的技術(shù)細(xì)節(jié)北救，也適用于其他應(yīng)用。液態(tài)變焦透鏡具有大光圈芜抒、快速響應(yīng)和驅(qū)動(dòng)時(shí)間以及良好的光學(xué)質(zhì)量珍策，為顯微鏡下的多種應(yīng)用提供了廣闊的前景。在本應(yīng)用文章中宅倒，我們討論了在三種不同的顯微鏡方法中實(shí)現(xiàn)快速軸向聚焦的液態(tài)變焦透鏡的應(yīng)用：(1) 傳統(tǒng)的寬場(chǎng)熒光顯微鏡攘宙，(2) 熒光共聚焦顯微鏡，以及 (3) 雙光子顯微鏡拐迁。

 

 

2.液態(tài)變焦透鏡技術(shù)

Optotune的液態(tài)變焦透鏡基于彈性聚合物材料蹭劈。透鏡的核心部分由一個(gè)薄膜組成，它在充滿液體的腔室和空氣之間形成一個(gè)界面（圖1）线召。為了調(diào)節(jié)焦距铺韧，一個(gè)音圈執(zhí)行器對(duì)圍繞透鏡清晰孔徑的液體儲(chǔ)層施加壓力。液體因此被壓入透鏡中心缓淹，改變薄膜的曲率哈打。控制液態(tài)變焦透鏡非常簡(jiǎn)單讯壶，只需要一個(gè)現(xiàn)成的電流控制器或透鏡驅(qū)動(dòng)器料仗，為透鏡提供0到290 mA的電流即可。

圖1  (a, b)：Optotune液態(tài)變焦透鏡的工作原理伏蚊。電流控制的電磁或機(jī)械執(zhí)行器向下推動(dòng)充滿液體的鏡頭容器罢维，迫使鏡頭液體進(jìn)入鏡頭中心并改變其形狀 (c) 對(duì)于ETL，Optotune提供了一個(gè)軟件控制的鏡頭驅(qū)動(dòng)器（d）它提供電流 (e) Optotune的ETL的典型響應(yīng)時(shí)間約為5 ms量級(jí)。實(shí)際的穩(wěn)定時(shí)間會(huì)隨著鏡頭孔徑的變化而變化肺孵。感謝Optotune提供的信息匀借。

有一系列液態(tài)變焦透鏡可供選擇，其孔徑范圍從6 mm到16 mm不等平窘。具有高色散和低色散鏡頭液體的版本吓肋，其典型的焦距范圍分別為52到120 mm，或80到200 mm瑰艘。在操作過(guò)程中是鬼，控制電流可能會(huì)加熱鏡頭，導(dǎo)致溫度依賴的焦點(diǎn)漂移紫新。由于液體鏡頭的熱焦距膨脹大約是玻璃鏡頭的100倍均蜜，因此鏡頭需要集成溫度傳感器。結(jié)合靠近液體的溫度傳感器以及鏡頭上存儲(chǔ)的校準(zhǔn)曲線芒率，USB驅(qū)動(dòng)固件可以計(jì)算出正確的電流值囤耳，以設(shè)定并保持鏡頭在給定的焦距功率。

 

液態(tài)變焦透鏡的一個(gè)巨大優(yōu)勢(shì)是其響應(yīng)時(shí)間非常短偶芍，只需幾ms充择。圖1e顯示了作為時(shí)間函數(shù)的歸一化折射功率對(duì)矩形階躍脈沖的典型響應(yīng)示例。液態(tài)變焦透鏡在240至2500 nm范圍內(nèi)提供大的透射率匪蟀，并具有高損傷閾值（在1064 nm連續(xù)波操作下為10 KW/cm2）椎麦，并且它們保持光的偏振態(tài)。

 

3. 在顯微鏡中集成液態(tài)變焦透鏡

液態(tài)變焦透鏡可用于顯微鏡的不同應(yīng)用材彪。這些包括專門的可調(diào)照明系統(tǒng)以及電控變焦光學(xué)系統(tǒng)等观挎。

在標(biāo)準(zhǔn)顯微鏡中，軸向聚焦通常是通過(guò)移動(dòng)樣品在 z 軸上或顯微鏡物鏡上移動(dòng)樣品來(lái)實(shí)現(xiàn)的段化。精確聚焦的常見(jiàn)替代解決方案是使用壓電驅(qū)動(dòng)的物鏡支架键兜。然而，這些聚焦技術(shù)是基于相對(duì)于樣品的機(jī)械軸向移動(dòng)穗泵。如果使用光學(xué)聚焦方案普气，可以實(shí)現(xiàn)無(wú)移動(dòng)甚至更快的聚焦。實(shí)現(xiàn)光學(xué)聚焦的一個(gè)便捷方案是在顯微鏡的光路中加入液態(tài)變焦透鏡佃延。

現(xiàn)代顯微鏡使用無(wú)限遠(yuǎn)校正物鏡现诀，這意味著從樣本發(fā)出的光線以平行光束的形式從物鏡中射出。為了創(chuàng)建圖像履肃，需要一個(gè)額外的管鏡頭（圖2）仔沿。相反，通過(guò)將準(zhǔn)直激光束送入物鏡尺棋，激光被聚焦到樣本內(nèi)部的焦點(diǎn)封锉。通過(guò)可調(diào)焦鏡頭改變光束的準(zhǔn)直狀態(tài)可以移動(dòng)焦平面。例如，當(dāng)將發(fā)散光束送入物鏡時(shí)成福，焦點(diǎn)會(huì)從其前透鏡移開(kāi)碾局。

圖2  （a）在無(wú)限遠(yuǎn)校正光學(xué)系統(tǒng)的顯微鏡中，圖像由物鏡和管鏡頭形成奴艾。(b) 通過(guò)在物鏡和管鏡頭之間插入由兩個(gè)消色差透鏡組成的額外中繼系統(tǒng)净当，形成了一個(gè)共軛瞳孔。在這個(gè)位置放置液態(tài)變焦透鏡ETL和補(bǔ)償透鏡可以實(shí)現(xiàn)軸向聚焦蕴潦，而不會(huì)改變數(shù)值孔徑或放大倍數(shù)像啼。將液態(tài)變焦透鏡ETL和補(bǔ)償透鏡水平放置可以避免由于重力引起的透鏡膜變形。感謝Fabian F. Voigt提供的信息潭苞。

對(duì)于大多數(shù)三維顯微鏡應(yīng)用忽冻，需要能夠增加和減少物鏡的工作距離。一些液態(tài)變焦透鏡（ETL）僅限于在正焦距限制之間進(jìn)行調(diào)節(jié)此疹。在這種情況下僧诚，需要將它們與固定的負(fù)偏移透鏡（OL）配對(duì)，以將光束從收斂變?yōu)榘l(fā)散秀菱。

 

當(dāng)通過(guò)顯微鏡的目鏡觀察時(shí)振诬，人類觀察者會(huì)移動(dòng)他們的頭部蹭睡，直到他們的眼睛位于顯微鏡的出瞳位置衍菱，出瞳通常可見(jiàn)為似乎懸浮在目鏡上方的小亮點(diǎn)肩豁。當(dāng)眼睛位于出瞳位置時(shí)脊串，它們對(duì)微觀圖像有非常好的概覽，并且作為“集成”的人類聚焦設(shè)備表現(xiàn)非常佳清钥。理想情況下琼锋，ETL/OL組合也應(yīng)該放置在這樣的瞳孔位置，但使用標(biāo)準(zhǔn)目鏡的出瞳通常并不有益：典型的管鏡頭和目鏡組合的高中間放大倍率嚴(yán)重限制了可用的聚焦范圍祟昭。這是因?yàn)檎{(diào)節(jié)范圍與顯微鏡放大倍率的平方成反比缕坎。

 

一個(gè)更好的選擇是使用定制的中繼系統(tǒng)（圖2）創(chuàng)建一個(gè)與顯微鏡物鏡共軛的瞳孔位置。需要小心地將ETL/OL組件放置在光路的垂直部分（圖2b）篡悟。否則谜叹，由于透鏡膜因重力引起的變形，圖像可能會(huì)表現(xiàn)出不需要的像差（特別是彗差）搬葬。在具有非常模塊化設(shè)計(jì)的新一代研究顯微鏡中荷腊，集成這樣的中繼系統(tǒng)通常很簡(jiǎn)便。

應(yīng)用示例：寬場(chǎng)顯微鏡

對(duì)于視覺(jué)使用來(lái)說(shuō)急凰，在聚焦時(shí)視場(chǎng)（FOV）或放大倍數(shù)的變化可能會(huì)造成混淆（因?yàn)樗囊曈X(jué)外觀對(duì)應(yīng)于變焦效果）女仰。對(duì)于小的聚焦增量（幾u(yù)m），這是可以容忍的，否則疾忍，這種效果會(huì)變得令人煩惱乔外。在這種情況下，將 ETL/OL 組合放置在共軛瞳孔位置是必要的锭碳。在大多數(shù)顯微鏡中袁稽，必須插入一個(gè)包含中繼光學(xué)元件和 ETL/OL 組合的定制模塊到光路中。在典型的立式顯微鏡中擒抛，停止位置位于物鏡內(nèi)部推汽，無(wú)法訪問(wèn)，因此需要一個(gè)中繼系統(tǒng)歧沪。然而歹撒，在倒置顯微鏡中，共軛瞳孔通常由顯微鏡體內(nèi)的光學(xué)元件形成诊胞，在某些類型的顯微鏡中暖夭，這個(gè)瞳孔是可以訪問(wèn)的，并且位于光路的垂直部分撵孤，這使得它非常適合插入基于液態(tài)變焦透鏡的聚焦系統(tǒng)迈着。圖 3 所示即為這樣的顯微鏡，即 1980 年代的蔡司 Axiovert 35邪码。

圖3  Axiovert 35顯微鏡的光路裕菠。ETL/OL組件可以放置在瞳孔，而無(wú)需插入額外的中繼系統(tǒng)闭专。TL:管鏡頭

圖4  帶有移除側(cè)蓋以訪問(wèn)瞳孔的 Axiovert 35 顯微鏡奴潘。圖3中突出顯示了一些光學(xué)組件

圖5  在共軛瞳孔位置插入ETL/OL組件。液態(tài)變焦透鏡ETL和OL安裝在連接到光軌上的柱子上影钉。插圖:通過(guò)尋找相位環(huán)的清晰圖像可以找到共軛瞳孔的位置画髓。

結(jié)論

結(jié)合使用 40x NA 0.6 物鏡（Zeiss LD Achroplan 40x / 0.6 Korr Ph2），可以實(shí)現(xiàn)高達(dá) 120 um的離焦范圍（校正環(huán)被設(shè)置在固定位置）平委。圖 6 顯示了使用液態(tài)變焦透鏡聚焦拍攝的一組花粉粒（上皮熒光模式）的 z-stack 樣例圖像奈虾。

圖6 通過(guò)一組花粉粒進(jìn)行基于液態(tài)變焦透鏡的聚焦。圖像范圍從名義成像平面的 -30 um到 +25 um 廉赔。由于液態(tài)變焦透鏡位于共軛瞳孔的位置肉微，因此沒(méi)有放大倍數(shù)的變化。比例尺：100 um

應(yīng)用實(shí)例:共聚焦顯微鏡

共聚焦顯微鏡是重要的顯微鏡技術(shù)之一昂勉，在細(xì)胞生物學(xué)浪册、單分子物理學(xué)等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。

 

標(biāo)準(zhǔn)的共聚焦顯微鏡是高度集成的系統(tǒng)岗照，無(wú)法在大部分光學(xué)路徑中訪問(wèn)或插入光學(xué)元件村象。根據(jù)具體的顯微鏡型號(hào)笆环，插入ETL/OL組件有多種解決方案。一種可能性是在顯微鏡臺(tái)的濾光輪中安裝一個(gè)定制的濾光立方體厚者，如果濾光立方體對(duì)共聚焦成像不是必需的躁劣，可以將ETL/OL組件安裝在這個(gè)濾光立方體中】夥疲或者账忘，液態(tài)變焦透鏡可以安裝在一個(gè)中繼系統(tǒng)中（圖7）

 

我們使用的顯微鏡（圖8）是帶有共聚焦單元（Yokogawa CSU X1）和ccd相機(jī)的轉(zhuǎn)盤共聚焦顯微鏡，這些設(shè)備安裝在奧林巴斯IX-71的側(cè)面端口上熙宇。這種顯微鏡配置允許插入一個(gè)包含液態(tài)變焦透鏡ETL和OL的改裝原始濾光立方體到濾光輪中鳖擒，而無(wú)需對(duì)顯微鏡進(jìn)行大量修改。在操作過(guò)程中烫止，只需將濾光輪旋轉(zhuǎn)到一個(gè)空位置蒋荚，就可以簡(jiǎn)單地將液態(tài)變焦透鏡ETL從光學(xué)路徑中移除。

圖7  在典型的倒置激光掃描顯微鏡中實(shí)現(xiàn)基于液態(tài)變焦透鏡的聚焦有三種不同的選項(xiàng)馆蠕。

（1） ETL/OL可以像壓電驅(qū)動(dòng)的聚焦裝置一樣期升，放置在顯微鏡物鏡和物鏡轉(zhuǎn)盤之間。

（2） 如果可能的話互躬，液態(tài)變焦透鏡ETL和OL可以安裝在一個(gè)定制的濾光立方體中播赁。這兩個(gè)選項(xiàng)都有一個(gè)共同的缺點(diǎn)，那就是在聚焦過(guò)程中可能會(huì)有顯著的放大倍數(shù)變化吼渡。

（3） 為了避免這種情況容为，可以在共聚焦掃描單元和顯微鏡臺(tái)之間插入一個(gè)中繼系統(tǒng)。為了獲得非常佳的系統(tǒng)性能诞吱，液態(tài)變焦透鏡ETL應(yīng)該位于光學(xué)路徑的垂直部分——否則舟奠，由于重力引起的不對(duì)稱變形可能會(huì)導(dǎo)致可調(diào)膜的圖像質(zhì)量下降竭缝。

圖8  在共聚焦顯微鏡中實(shí)現(xiàn)液態(tài)變焦透鏡ETL和OL的實(shí)施房维。(a) 旋轉(zhuǎn)圓盤單元安裝在顯微鏡架的左側(cè)端口。藍(lán)色CCD相機(jī)用于成像抬纸×控制液態(tài)變焦透鏡ETL的電流轉(zhuǎn)換器由函數(shù)發(fā)生器控制。ETL/OL組件安裝在定制的濾光片轉(zhuǎn)盤(b)中湿故，并插入濾光片轉(zhuǎn)盤(c)阿趁。濾光片轉(zhuǎn)盤重新插入到顯微鏡架的目標(biāo)轉(zhuǎn)盤正下方的位置。

結(jié)論

結(jié)合使用40倍NA 1.3物鏡（奧林巴斯UPLFLN 40XO）坛猪，可以實(shí)現(xiàn)60 um的Z軸范圍脖阵。 圖9顯示了一個(gè)花粉粒（100 um直徑）的Z軸堆疊的單個(gè)切片。

圖 9 花粉粒的Z軸堆疊（100 um直徑）墅茉，覆蓋范圍為60um命黔。相對(duì)于第1張圖像的Z軸位置已標(biāo)示呜呐。比例尺：50um

圖 10   圖6所示數(shù)據(jù)的Max強(qiáng)度投影。

應(yīng)用實(shí)例:雙光子顯微鏡

由于在散射介質(zhì)中具有優(yōu)異的成像能力悍募，雙光子激發(fā)是一種非常適合于組織深層熒光成像的技術(shù)蘑辑。結(jié)合神經(jīng)活動(dòng)的功能性指標(biāo)和活體成像協(xié)議，雙光子顯微鏡是一種標(biāo)準(zhǔn)方法坠宴，用于記錄活體小鼠大腦深處數(shù)十至數(shù)百個(gè)神經(jīng)元群體的活動(dòng)洋魂。神經(jīng)元分布在一個(gè)體積中，采樣單一焦平面只能提供局部網(wǎng)絡(luò)中發(fā)生的整體活動(dòng)的線索喜鼓。因此副砍，需要快速且簡(jiǎn)單的3D顯微鏡技術(shù)——使用液態(tài)變焦透鏡提供了一種非常簡(jiǎn)單直接的方法。實(shí)際上庄岖，液態(tài)變焦透鏡和雙光子顯微鏡是理想的組合址晕，原因如下：

（1） 在大多數(shù)雙光子顯微鏡中，可以通過(guò)僅在激發(fā)路徑中實(shí)現(xiàn)光學(xué)聚焦方案來(lái)實(shí)現(xiàn)軸向掃描顿锰。這是因?yàn)殡p光子顯微鏡中使用的非線性激發(fā)過(guò)程谨垃，只能在焦點(diǎn)處激發(fā)熒光團(tuán)。通過(guò)改變激發(fā)光束來(lái)軸向和橫向移動(dòng)焦點(diǎn)硼控，對(duì)于3D雙光子激光掃描顯微鏡來(lái)說(shuō)是足夠的刘陶。

（2） 激發(fā)激光器在近紅外波長(zhǎng)下工作，在我們的顯微鏡中為850 nm牢撼。長(zhǎng)波長(zhǎng)允許容忍波前畸變匙隔，這些畸變?cè)?mark class="span_mark" data-type="1">可見(jiàn)光波長(zhǎng)下會(huì)嚴(yán)重降低圖像質(zhì)量。

（3） 激發(fā)激光的小光譜帶寬（10 nm FWHM）限制了非色散ETL/OL組合可能引入的色差影響熏版。

（4） 對(duì)于大多數(shù)測(cè)量功能性細(xì)胞活動(dòng)的生物學(xué)應(yīng)用來(lái)說(shuō)纷责，安裝在物鏡附近的ETL/OL組件引入的視場(chǎng)大小變化不會(huì)干擾測(cè)量。為了記錄功能數(shù)據(jù)撼短，激光必須在一段時(shí)間內(nèi)反復(fù)指向同一組細(xì)胞再膳。如果由于放大倍數(shù)的變化導(dǎo)致細(xì)胞間隔變遠(yuǎn)，可以選擇相應(yīng)的點(diǎn)進(jìn)行掃描曲横。

裝置

與定制雙光子顯微鏡結(jié)合使用的裝置如圖11所示喂柒。

圖 11  在雙光子顯微鏡中實(shí)現(xiàn)ETL/OL組件的安裝。液態(tài)變焦透鏡ETL和OL安裝在與顯微鏡檢測(cè)系統(tǒng)相連的定制物鏡支架上禾嫉。使用可移動(dòng)的二色分光片DC灾杰，發(fā)射的熒光可直接被導(dǎo)向背景中的檢測(cè)系統(tǒng)。RMS螺紋位于支架底部熙参，允許奧林巴斯LUMPlanFl/IR 40x NA 0.8水浸物鏡連接艳吠。(b) 液態(tài)變焦透鏡ETL和OL安裝在定制架內(nèi)的剖面圖。(c)熒光素溶液中雙光子激發(fā)焦點(diǎn)的直接可視化孽椰。焦點(diǎn)（綠色長(zhǎng)形斑點(diǎn)）可以在與40x物鏡結(jié)合使用時(shí)在高達(dá)700 um的范圍內(nèi)移動(dòng)昭娩。

結(jié)論

通過(guò)將液態(tài)變焦透鏡的焦距調(diào)節(jié)在50至200 mm之間泥兰，實(shí)現(xiàn)了高達(dá)700 um的軸向聚焦。物鏡的工作距離(標(biāo)稱為3.3 mm) 相應(yīng)變化為2.8 ~ 3.41 mm题禀。對(duì)于大多數(shù)成像應(yīng)用來(lái)說(shuō)鞋诗，一個(gè)更小的范圍就足夠了。

圖 12 軸向焦點(diǎn)偏移（40x物鏡迈嘹，-100 mm偏移透鏡）對(duì)施加于液態(tài)變焦透鏡的控制電流的依賴性削彬。這組校準(zhǔn)值被用作查找表，以聚焦到期望的位置秀仲。

圖13 在不同軸向焦點(diǎn)位移下融痛，無(wú)ETL (左圖)和有ETL的重新聚焦的花粉顆粒圖像，用顯微鏡的電動(dòng)z級(jí)進(jìn)行測(cè)量神僵。請(qǐng)注意放大倍數(shù)/視場(chǎng)（FOV）大小的變化雁刷。比例尺：5 um

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使用Optotune液態(tài)變焦透鏡的出版文獻(xiàn)

1.· B. F. Grewe, F. F. Voigt, M. van’t Hoff, and F. Helmchen, “Fast two-layer two-photon imaging of neuronal cell populations using an electrically tunable lens,” in Biomedical Optics Express 2, 7, 2035- 2046 (2011).

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http://proceedings.spiedigitallibrary.org/proceeding.aspx?articleid=1656293

3.· F. O. Fahrbach, F. F. Voigt, B. Schmid, F. Helmchen, and J. Huisken, “Rapid 3D light-sheet microscopy with a tunable lens,” in Optics Express 21, 18, 21010-21026 (2013).

(http://www.opticsinfobase.org/oe/abstract.cfm?uri=oe-21-18-21010)

4.· J. L. Chen, O. A. Pf?FFLi, F. F. Voigt, D. J. Margolis, and F. Helmchen, “Online correction of licking-induced brain motion during two-photon imaging with a tunable lens,” in Journal of Physiology 00.00, 1-10 (2013).

(http://jp.physoc.org/content/early/2013/08/29/jphysiol.2013.259804.abstract?sid=52004717-fd2e- 4c39-8c6a-24cc2df0645a)

5.· J. M. Jabbour, B. H. Malik, C. Olsovsky, R. Cuenca, S. Cheng, J. A. Jo, Y.-S. L. Cheng, J. M. Wright, and K. C. Maitland, “Optical axial scanning in confocal microscopy using an electrically tunable lens”, Biomedical Optics Express 5, 2, 645-652 (2014). http://dx.doi.org/10.1364/BOE.5.000645