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2019年 Optics Express:傅里葉光場顯微鏡

發(fā)布時間:2022-04-24 14:06:27 瀏覽量:4915 作者:LY.Young 光學(xué)前沿

摘要

光場顯微鏡 (lifgt-field microscopy, LFM) 同時采集入射光的二維空間和二維角度信息,可以從單個相機幀計算重建樣本的完整三維體積凛篙。與其它以順序或掃描方式累積空間信息的熒光成像技術(shù)不同黍匾,這種四維成像方案有效地從空間尺度(例如視場 (FOV) 和空間分辨率)上減小了體積采集時間,從而使 LFM 成為生物系統(tǒng)高速體積成像的有效工具之一呛梆,并具有低光損傷的特點锐涯。新的 LFM 技術(shù)已經(jīng)證明了其能夠應(yīng)用于功能性腦成像,在數(shù)十至數(shù)百微米的深度保持細胞級空間分辨率填物,體積采集時間為 10 毫秒級纹腌。甚至,該方法zui近已被證明用于觀察單細胞標(biāo)本的結(jié)構(gòu)和動力學(xué)滞磺,具有接近衍射極限的三維空間分辨率壶笼、數(shù)微米的成像深度(足以覆蓋單個細胞的大部分體積),以及毫秒級的采集時間雁刷。

正文


2019年 Optics Express:傅里葉光場顯微鏡



技術(shù)背

光場顯微鏡 (lifgt-field microscopy, LFM) 同時采集入射光的二維空間和二維角度信息,可以從單個相機幀計算重建樣本的完整三維體積保礼。與其它以順序或掃描方式累積空間信息的熒光成像技術(shù)不同沛励,這種四維成像方案有效地從空間尺度(例如視場 (FOV) 和空間分辨率)上減小了體積采集時間责语,從而使 LFM 成為生物系統(tǒng)高速體積成像的有效工具之一,并具有低光損傷的特點目派。新的 LFM 技術(shù)已經(jīng)證明了其能夠應(yīng)用于功能性腦成像坤候,在數(shù)十至數(shù)百微米的深度保持細胞級空間分辨率,體積采集時間為 10 毫秒級企蹭。甚至白筹,該方法zui近已被證明用于觀察單細胞標(biāo)本的結(jié)構(gòu)和動力學(xué),具有接近衍射極限的三維空間分辨率谅摄、數(shù)微米的成像深度(足以覆蓋單個細胞的大部分體積)徒河,以及毫秒級的采集時間。對于傳統(tǒng)的 LFM送漠,微透鏡陣列 (MLA) 放置在寬視場顯微鏡的原生像平面 (native image plane, NIP) 上顽照,并且光學(xué)信號以欠采樣方式記錄在 MLA 后焦平面上。波動光學(xué)模型的發(fā)展闽寡,使得嚴重欠采樣的高頻空間信息可以通過對點擴散函數(shù)(PSF)求解卷積的方法得到一定程度的恢復(fù)代兵,從而放寬空間和角度信息之間的權(quán)衡要求。


當(dāng)前不足:

當(dāng)前有兩個主要因素限制了 LFM 的更廣泛應(yīng)用爷狈。首先植影,LFM 的空間信息的采樣模式是不均勻的。特別是在NIP附近涎永,信息的冗余導(dǎo)致重建時產(chǎn)生嚴重的偽影思币。其次,體積重建采用波動光學(xué)模型的 PSF 解卷積土辩。傳統(tǒng) LFM 的 PSF 在橫向和軸向維度上都有空間變化支救,因此用5D 矩陣描述,該矩陣將 3D 物體投影到 2D 相機平面上拷淘。這加劇了計算成本各墨,使得重建相當(dāng)緩慢,并且對于動態(tài)或功能數(shù)據(jù)的快速觀察來說是不切實際的启涯。zui近雖然提出了傅立葉成像方案贬堵,然而,其光學(xué)傳播模型并不完善结洼,使得應(yīng)用范圍和成像性能都不佳黎做。


文章創(chuàng)新點:

基于此,佐治亞理工學(xué)院和埃默里大學(xué)的Changliang Guo(第1作者)和Shu Jia(通訊作者)等人為傅里葉光場顯微鏡構(gòu)建了完整的光傳播松忍、成像和重建模型蒸殿,并基于此模型構(gòu)建了傅里葉光場顯微鏡的通用設(shè)計原則。


原理解析:

(1)圖像形成。如圖1(a)所示宏所,傅里葉透鏡(FL)將NIP平面(Iris平面位置)的光場變換到傅里葉域(FD)酥艳,MLA進一步將此波前(即FD)分割,每一個微透鏡傳遞相應(yīng)的空間頻率(即角度信息)到其后焦平面被相機記錄爬骤。

(2)光傳播模型充石。首先,使用標(biāo)量Debye理論將三維物體信息投影到二維NIP面霞玄。然后骤铃,將二維NIP面的波前用傅里葉變換獲得FD面的波前。zui后坷剧,F(xiàn)D面的波前經(jīng)過MLA調(diào)制后利用菲涅爾傳播理論獲得相機平面的波前惰爬。

(3)重建算法。使用基于Richardson-Lucy迭代機制的解卷積算法求出三維空間信息听隐。



視頻1:使用 FLFM 對小鼠腎臟組織進行成像补鼻。重建體積:67 μm × 67 μm ×20 μm。


附錄:

(1)光場顯微鏡(上)和傅里葉光場顯微鏡(下)成像對比



(2)傅里葉光場顯微鏡設(shè)計原則


(3)傅里葉光場顯微鏡算法流程圖


參考文獻:Changliang Guo, Wenhao Liu, Xuanwen Hua, Haoyu Li, and Shu Jia, "Fourier light-field microscopy," Opt. Express 27, 25573-25594 (2019)
DOI:https://doi.org/10.1364/OE.27.025573


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