快速準(zhǔn)確地識別流感病毒對于預(yù)防未來大流形病爆發(fā)非常重要趁耗。韓國Taejoon Kang教授使用表面增強(qiáng)拉曼散射（SERS）抗體探針開發(fā)
了一種簡便靈敏的流感病毒檢測方法屁置。SERS抗體探針可以通過混合Au納米顆粒、金結(jié)合肽-蛋白G和抗體簡易制備朗若，無需復(fù)雜的化學(xué)或
生物反應(yīng)恼五。它們還保留了抗體與流感A/CA/07/2009 (pH1N1)相互作用的最佳構(gòu)象，使我們能夠靈敏地哭懈、有選擇性地檢測pH1N1.這個
方法提供的檢測限為4.1 ×103TCID/ml,對pH1N1具有高度選擇性灾馒。
金屬膠體納米顆粒由于穩(wěn)定性高、大小可調(diào)遣总、光學(xué)性能獨(dú)特和生物相容性被廣泛用于超靈敏檢測探針睬罗，尤其在SERS中，分子的拉曼信
號增加108旭斥∪荽铮基于SERS的實(shí)驗(yàn)有單分子水平靈敏度、分子特異性和減少光漂白的優(yōu)勢垂券。許多基于納米顆粒的金屬探針被用來檢
DNA,RNA花盐，蛋白質(zhì)，病原體菇爪，癌細(xì)胞和化學(xué)物質(zhì)算芯，然而很少有報道使用SERS探針直接檢測病毒。
本文報道了通過SERS抗體探針簡便靈敏地檢測流感病毒凳宙。通過免疫反應(yīng)將流感A/CA/07/2009 (pH1N1)捕獲到基底上熙揍，然后應(yīng)用SERS
抗體探針。在探針Ag增強(qiáng)下近速，通過SERS檢測到了低濃度的pH1N1,并且將pH1N1和其他類型流感病毒區(qū)分開來诈嘿。這個方法有明顯的優(yōu)
勢堪旧。首先，SERS抗體探針可以通過混合Au納米顆粒奖亚、金結(jié)合肽-蛋白G和抗體制備淳梦，不需要復(fù)雜的化學(xué)或生物反應(yīng)。第二昔字，蛋白質(zhì)-G抗
體保留了與流感A/CA/07/2009 (pH1N1)相互作用的最優(yōu)構(gòu)象爆袍，因此和隨意標(biāo)記的抗體相比可以有效檢測。第三作郭，通過Ag增強(qiáng)和SERS
測試可以靈敏和定量檢測pH1N1陨囊。
圖1 SERS抗體探針檢測流感病毒示意圖
使用 SERS 抗體探針的流感病毒檢測方法如圖 1 所示。捕獲底物是通過將蛋白 G 和羧化玻璃底物通過酰胺鍵偶聯(lián)夹攒，然后用抗 pH1N1
的多克隆抗體處理來制備的蜘醋。 BSA 用于防止非特異性結(jié)合。 為了檢測 pH1N1咏尝，將含有 pH1N1 的溶液滴在捕獲基底上压语，并應(yīng)用
SERS 抗體探針，然后使用Ag增強(qiáng)劑溶液增強(qiáng)探針编检。只有在 pH1N1 存在的情況下胎食，SERS 抗體探針才能被下拉到基板上，并且在 Ag
增強(qiáng)后獲得強(qiáng)烈的 SERS 信號允懂。
圖2(A) 使用 SERS 抗體探針的在不同濃度（空白厕怜、103、104蕾总、105粥航、106 和 107 TCID/mL）下的流感病毒檢測結(jié)果 (B) 1643 cm -1 的 SERS 強(qiáng)度與流感病毒濃度的關(guān)系圖。 藍(lán)線顯示線性擬合線生百。 數(shù)據(jù)代表十次測量的平均值加標(biāo)準(zhǔn)偏差躁锡。
本文研究了來自捕獲基底上的探針的 pH1N1 濃度依賴性 SERS 信號。 pH1N1溶液按1/10系列稀釋制備置侍，制備空白溶液作為對照。
如圖 2A 所示拦焚，SERS 信號隨著 pH1N1 濃度的增加而增強(qiáng)蜡坊。通過繪制 1643 cm- 1 帶的強(qiáng)度作為 pH1N1 濃度的函數(shù)來進(jìn)一步分析該
結(jié)果（圖 2B）。 SERS 信號強(qiáng)度在 103 至 107 TCID/mL 的濃度范圍內(nèi)線性增加赎败，從而實(shí)現(xiàn) pH1N1 的定量檢測秕衙。估計該方法的檢測
限為4.1 ×103 TCID/mL (65 ng mL- 1)〗┕危基于 PCR 的檢測顯示檢測限為102 TCID/mL 水平据忘， 與之前報道的免疫測定法相比鹦牛，本方法
具有更低的檢測限和更寬的動態(tài)范圍。
圖3 (A) 分別在 pH1N1勇吊、H3N2曼追、H5N2 和 IBV 存在下 RBITC 的 SERS 光譜。
(B) 1643 cm -1 處的 SERS 強(qiáng)度與流感病毒的類型汉规。
(C) 在 (A) 中獲得 SERS 光譜基底的 SEM 圖像
為了驗(yàn)證該方法的選擇性礼殊，測試了四種不同類型的流感病毒（pH1N1、H3N2针史、H5N2 和 IBV）晶伦。每種病毒的濃度為 107 TCID/mL。
圖3A顯示了在四種流感病毒存在下探針的SERS光譜啄枕。 僅在存在 pH1N1 時觀察到強(qiáng)信號婚陪，而在存在 H3N2、H5N2 和 IBV 時觀察到
弱信號频祝。 1643 cm-1 條帶強(qiáng)度圖更清楚地證實(shí)了該方法對 pH1N1 的特異性（圖 3B）泌参。 圖 3C 中的 SEM 圖像還表明，許多放大的探
針僅在 pH1N1 存在時才存在智润。 由于 SERS 抗體探針可以簡單地用各種流感病毒特異性抗體進(jìn)行修改及舍，預(yù)計本方法將有助于識別流感
病毒類型。
展示全部 
