波前傳感是用于研究光束像差的眾所周知的技術舱权。在大多數(shù)應用中,只考慮低階像差(如球差或彗差)仑嗅,因為像差階越低宴倍,對光束的影響越強。因此仓技,數(shù)千個相位測量點足以分析光束波前并隨后補償?shù)碗A像差鸵贬,這是 Shack-Hartmann 波前傳感器 (SHWFS) 所允許的,主要用于自適應光學脖捻。波前傳感器 (WFS) 的主要功能是對給定平面中的相位進行采樣恭理,該平面通常對應于放置傳感器的平面:與數(shù)字全息術不同,無需使用參考臂郭变。當然颜价,可以將 WFS 平面與給定的物平面光學共軛涯保。對于相位顯微鏡,放置在物平面中的樣品引入的相移可以由 WFS 直接測量周伦,允許定量相移成像夕春,其中 WFS 分辨率和測量點數(shù)現(xiàn)在成為目前排除使用的關鍵因素Shack-Hartmann 傳感器,分辨率有限
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生物學家關注顯微鏡時重要的問題之一是大多數(shù)生物標本的振幅對比度差专挪。 因此及志,生物學家經(jīng)常采用相襯光學技術,該技術依靠光學機制將樣本中的微小折射率變化轉(zhuǎn)換為實際圖像中相應的幅度變化寨腔。 這種技術的主要優(yōu)點是活細胞可以在其自然狀態(tài)下進行檢查速侈,而無需事先被殺死、固定和/或染色迫卢。 Zernike contrast 允許樣品界面的可視化倚搬,但橫向分辨率相對較差,并且偽影的出現(xiàn)妨礙了任何正確的定量相位測量乾蛤。
Nomarski 對比(或 DIC 用于微分干涉對比)顯微鏡是一種更流行的相位成像技術每界,可在一個方向上提供樣品相位梯度。圖像呈現(xiàn)的輸出強度是振幅和相位梯度對比與對樣本中光路長度梯度的非線性響應的混合家卖。標準 DIC 系統(tǒng)本質(zhì)上大多是定性的眨层。這就是為什么一些研究項目提出將相移方法應用于DIC來獲取線性相位梯度圖像。特別是上荡,已經(jīng)提出了一種結合相移趴樱、兩個剪切方向和使用改進的螺旋相位的傅里葉空間積分的方法,以將 DIC 顯微鏡擴展到定量線性相位成像技術酪捡。Z近伊佃,Bernet 和他的同事證明,用螺旋相位板的不同旋轉(zhuǎn)方向記錄的至少 3 個空間濾波圖像序列可用于獲得復雜微觀樣本的幅度和相位信息的定量重建.對于實際成像沛善,此方法需要使用參考相位樣本進行校準。
干涉測量法塞祈,尤其是數(shù)字全息術當然也可用于渲染顯微鏡下可見的相位結構金刁。 數(shù)字全息顯微鏡提供了光路長度分布的定量測量,允許用衍射限制的橫向分辨率和亞波長軸向精度來描述活細胞议薪。 Z近尤蛮,該方法被應用于進行花粉粒的光學衍射斷層掃描,以及細胞和多細胞生物的斷層成像斯议。 因為它們依賴于 Mach-Zender 干涉儀产捞,所以這些方法需要時間相干源(通常是激光),重要的是必須仔細控制其光程長度的參考臂哼御。
波前傳感是用于研究光束像差的眾所周知的技術坯临。在大多數(shù)應用中焊唬,只考慮低階像差(如球差或彗差),因為像差階越低看靠,對光束的影響越強赶促。因此,數(shù)千個相位測量點足以分析光束波前并隨后補償?shù)碗A像差挟炬,這是 Shack-Hartmann 波前傳感器 (SHWFS) 所允許的鸥滨,主要用于自適應光學。波前傳感器 (WFS) 的主要功能是對給定平面中的相位進行采樣谤祖,該平面通常對應于放置傳感器的平面:與數(shù)字全息術不同婿滓,無需使用參考臂。當然粥喜,可以將 WFS 平面與給定的物平面光學共軛凸主。對于相位顯微鏡,放置在物平面中的樣品引入的相移可以由 WFS 直接測量容客,允許定量相移成像秕铛,其中 WFS 分辨率和測量點數(shù)現(xiàn)在成為目前排除使用的關鍵因素Shack-Hartmann 傳感器,分辨率有限缩挑。
已經(jīng)提出了數(shù)字波前傳感 (DWFS)但两,它依賴于觀察強度圖像隨小散焦而變化的方式,并使用這些強度變化來恢復相位供置。 該方法Z初是在 Born 近似下提出的谨湘,現(xiàn)已擴展到圍繞中間平面對稱的結構簡單的厚物體,并應用于測量一系列滲透條件下的紅細胞體積芥丧。 該技術需要在不同的偏移平面中進行多次測量(至少 3 次)紧阔,并且偏移值需要精確才能獲得定量測量。
Phasics公司提出了一種基于四波橫向剪切干涉儀 (QWLSI) 的 WFS 相位成像顯微鏡的新應用续担。與 DWFS 不同擅耽,該技術只需要一次測量,無需任何移動元素物遇,即可恢復相位和強度乖仇。與 Shack-Hartmann WFS 相比,QWLSI 有可能以更高的橫向分辨率對強度和相位圖像進行采樣询兴。此外乃沙,它是一種消色差干涉技術,與傳統(tǒng)寬視場顯微鏡的白光照明路徑兼容诗舰。我們考慮將 QWLSI 與傳統(tǒng)的白光透射顯微鏡結合使用警儒。盡管 Primot 等人已經(jīng)對使用改進的 Hartmann 掩模 (MHM) 的 QWLSI 的特性進行了嚴格研究。Phasics公司提出了波動光學和幾何光學之間的簡單聯(lián)系眶根,以解釋光源的空間相干性對相位測量的影響蜀铲。在對基于 QWLSI 的 WFS 進行理論分析后边琉,展示了它對相位顯微鏡的興趣,并通過測量校準的測試樣本來量化其準確性蝙茶。然后將該技術應用于活細胞成像艺骂。
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